离心沉淀淋巴细胞分离培养需要多久
参考以下方法:
1.抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中,加等量含5~10IU/ml肝素的无血清缓冲液悬浮细胞。将细胞悬液小心加在与血液等量的淋巴细胞分离液上,室温中,水平离心500×g 20分钟。此时离心管中形成5层:最上面是血浆,血浆层和淋巴细胞分离液之间是PBMC,淋巴细胞分离液层和最下面的红细胞层之间是粒细胞层,又成为棕黄层。
2.吸去最上层的血浆,收集血浆层和淋巴细胞分离液交界面的单个核细胞,尽量全部吸出PBMC。加1~2倍量含5IU/ml肝素、2%灭活小牛血清的Hanks液(洗涤液),混匀后离心200×g 10分钟,低速离心有利于去除细胞悬液中留存的血小板,去上清液。
3.再用同样洗涤液洗涤细胞2次,每次离心500×g 10分钟,洗去残留的淋巴细胞分离液。用1%台盼蓝染色检测细胞活力(应>;95%)并计数细胞。再用含10%小牛血清的细胞培养液将细胞配成适当浓度。通常,每毫升外周血可得1×106~2×106PBMC
1.抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中,加等量含5~10IU/ml肝素的无血清缓冲液悬浮细胞。将细胞悬液小心加在与血液等量的淋巴细胞分离液上,室温中,水平离心500×g 20分钟。此时离心管中形成5层:最上面是血浆,血浆层和淋巴细胞分离液之间是PBMC,淋巴细胞分离液层和最下面的红细胞层之间是粒细胞层,又成为棕黄层。
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佚名
2024-06-16 16:12:56
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