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pcr扩增用的试剂有哪些?

pcr扩增所用的试剂:

pcr扩增步骤:

1.细菌染色体DNA的提取(见上一组) 

2.RAPD反应体系的配置(上图)

3·反应程序:将RAPD反应试剂加入EP管中 轻混后用100ul石蜡油覆盖于反应混合液之上,防止样品在反复加热-冷却的过程中蒸发,盖好盖子。

打开PCR反应仪输入以下反应数据 

·  94 摄氏度预变性5min 

·  94摄氏度变性40s 

·  40摄氏度退火40s 

·  72摄氏度延伸1min 

将EP管放入仪器开始扩增,循环35次;72摄氏度延伸10min

注意事项:

1、PCR反应体系中DNA样品及各种试剂的用量都极少,必须严格注意吸样量的准确性及全部放入反应体系中。 

2、为避免污染凡是用在PCR反应中的Tip尖、离心管、蒸馏水都要灭菌;吸每种试剂时都要换新的灭菌Tip尖。 

3、加试剂时先加消毒三蒸水,最后加DNA模板和Taq DNA聚合酶。 

4、置PCR仪进行PCR反应前,PCR管要盖紧,否则使液体蒸发影响PCR反应。 

5、引物条件首先引物与模板的序列要紧密互补,其次引物与引物之间避免形成稳定二聚体或发夹结构,再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。

佚名
2024-06-06 21:29:40
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